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Shanghai Yise Medical Technology Co.,Ltd.

《BCA蛋白定量試劑盒》說明書（版本PG26）

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貨號

儲存條件

本試劑盒在常溫保存。試劑盒內的BSA標準品，請放-20 oC保存。

產品原理

BCA蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）是進行蛋白質濃度測定的最常見的方法之一。

BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白質在堿性條件下，可以將二價Cu2+離子還原成一價Cu+離子。產生的一價Cu+離子可以與BCA（Bicinchoninic acid）試劑結合，最終生成紫色的復合物。該復合物在562 nm處有很強的吸收峰。復合物的多少與蛋白質的濃度呈接近的線性關系。

產品優點

?BCA蛋白定量試劑盒有許多優點：

1. 檢測的靈敏度高，檢測的蛋白質濃度下限可達20μg/mL。

2. 線性范圍廣，在20 - 2000μg/mL的范圍內，呈接近的線性關系。

3. 兼容性良好，產品可以兼容的化學物質非常廣泛（詳細的兼容情況見附錄）。

產品組成?

1. BCA試劑A: 500 mL.

2. BCA試劑B: 15 mL.

3. 蛋白標準品（BSA，2 mg/mL）：10 mL.

使用方法

1. BCA工作液的配制

（1）BCA工作液總體積的計算：

BCA工作液總體積 =（標準品數量+待測樣品數量+1）× 重復數 × 200 μL。

舉例：如果標準品數量為8，待測樣品數量1，重復數為3，則BCA工作液總體積=（8+1+1）×3×200 μL=6000 μL

（2）BCA工作液的配制：按50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1），充分混勻。

舉例：將5000 μL的BCA試劑A與100 μL的BCA試劑B混合，得到5100 μL的BCA工作液。

2. BSA標準品的配制

將BSA標準品做系列稀釋，分別得到如下9個不同濃度的標準品：2000μg/mL，1500μg/mL，1000μg/mL，500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，0μg/mL。

注：嚴格的蛋白定量，BSA標準品的稀釋溶液應該與待測蛋白樣品的溶液相同。但是一般情況下，BSA標準品可以直接用0.9% 的NaCl、PBS或者去離子水進行稀釋。

3. 取BSA標準品和待測樣品各25μL到96孔板孔內，

注：正常情況下，樣品與BCA工作液的體積之比應為1:8。如果樣品體積有限，也可使用10μL BSA標準品和待測樣品進行檢測（即樣品與BCA工作液的體積之比為1:20），這時BCA定量試劑盒的檢測范圍較小為125-2000 μg/mL。

4. 往每孔中加入200μL 的BCA工作液，蓋上96孔板蓋子。

5. 將96孔板放37 ℃，30分鐘。

6. 用酶標儀測562 nm處的光吸收值。

注：562 nm為最強的光吸收波長。如果無法檢測562 nm處的光吸收值， 也可以在540～595 nm波長范圍內檢測光吸收值。

7. 根據BSA標準品的光吸收值（扣除空白孔的光吸收值即為最終的讀數），繪制標準曲線。依據標準曲線計算待測樣品的蛋白濃度。

注意事項

1. 以上使用方法是根據96孔板進行設計的。此試劑盒也可以使用分光光度計進行測量。如果使用分光光度計測量562 nm處的光吸收值，則BSA標準品和待測樣品的體積使用量應調整為0.1 mL，而BCA工作液的使用量應調整為 2 mL。

2. 使用BCA蛋白定量試劑盒進行蛋白定量時，顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關。

3. 每次蛋白定量都需要重新做新的標準曲線，因為顯色反應的顏色與溫度和時間有關。

4. BCA試劑如果發現有細菌污染，則不能再使用。

本試劑盒與Thermo公司同類產品的比較

圖1. 比較實驗證明：上海易色BCA試劑盒與Thermo公司的BCA試劑盒（貨號：23227）幾乎完全一樣。而我們的價格只是其價格的50%左右，具有超高的性價比。

附錄

BCA蛋白定量兼容試劑列表1

Salts/Buffers Compatible Concentration

ACES, pH 7.8 25 mM

Ammonium sulfate 1.5 M

Asparagine 1 mM

Bicine, pH 8.4 20 mM

Bis-Tris, pH 6.5 33 mM

Borate (50mM), pH 8.5 undiluted

B-PER? Reagent undiluted

Calcium chloride in TBS, pH 7.2 10 mM

Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2 M), pH 9.4 undiluted

Cesium bicarbonate 100 mM

CHES, pH 9.0 100 mM

Na-Citrate (0.6 M), Na-Carbonate (0.1 M), pH 9.0 1:8 dilution with Water

Na-Citrate (0.6 M), MOPS (0.1 M), pH 7.5 1:8 dilution with Water

Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 0.8 mM

EPPS, pH 8.0 100 mM

Ferric chloride in TBS, pH 7.2 10 mM

Glycine?HCl, pH 2.8 100 mM

Guanidine?HCl 4 M

HEPES, pH 7.5 100 mM

Imidazole, pH 7.0 50 mM

MES, pH 6.1 100 mM

MES (0.1 M), NaCl (0.9%), pH 4.7 undiluted

MOPS, pH 7.2 100 mM

Modified Dulbecco’s PBS, pH 7.4 undiluted

Nickel chloride in TBS, pH 7.2 10 mM

PBS; Phosphate (0.1 M), NaCl (0.15 M),

pH 7.2 (# 28372) undiluted

PIPES, pH 6.8 100 mM

RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,

0.5% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 undiluted

Sodium acetate, pH 4.8 200 mM

Sodium azide 0.2%

Sodium bicarbonate 100 mM

Sodium chloride 1 M

Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 200 mM

Sodium phosphate 100 mM

Tricine, pH 8.0 25 mM

Triethanolamine, pH 7.8 25 mM

Tris 250 mM

TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15 M), pH 7.6 undiluted

Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0 1:3 dilution with Water

BCA蛋白定量兼容試劑列表2  

Detergents Compatible Concentration

Brij?-35 5.0%

Brij-56, Brij-58 1.0%

CHAPS, CHAPSO 5.0%

Deoxycholic acid 5.0%

Octyl β-glucoside 5.0%

Nonidet P-40 (NP-40) 5.0%

Octyl β-thioglucopyranoside 5.0%

SDS 5.0%

Span? 20 1.0%

Triton? X-100 5.0%

Triton X-114, X-305, X-405 1.0%

Tween?-20, Tween-60, Tween-80 5.0%

Zwittergent? 3-14 1.0%

Chelating agents

EDTA 10 mM

EGTA Incompatible

Sodium citrate 200 mM

Reducing & Thiol-Containing Agents

-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2 10 mM

Ascorbic acid Incompatible

Cysteine Incompatible

Dithioerythritol (DTE) 1 mM

Dithiothreitol (DTT) 1 mM

Glucose 10 mM

Melibiose Incompatible

2-Mercaptoethanol 0.01%

Potassium thiocyanate 3.0 M

Thimerosal 0.01%

BCA蛋白定量兼容試劑列表3 

Misc. Reagents & Solvents    Compatible Concentration

Acetone 10%

Acetonitrile 10%

Aprotinin 10 mg/L

DMF, DMSO 10%

DMSO 10%

Ethanol 10%

Glycerol (Fresh) 10%

Hydrazides Incompatible

Hydrides (Na2BH4 or NaCNBH3) Incompatible

Hydrochloric Acid 100 mM

Leupeptin 10 mg/L

                                                                     BCA蛋白定量不兼容（Incompatible）試劑列表1

注：使用BCA試劑盒進行蛋白定量，應該盡量避免使用上述不兼容試劑。如果樣品中含有上述試劑，可以通過透析、稀釋、TCA沉淀等方法盡可能去除影響。