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《Western Blot專用自發光Marker》

使用說明書（版本PK29）

產品亮點

《Western Blot專用自發光Marker》作用：（1）提供精確的分子量標準；（2）用于監控一抗、二抗和ECL過程；（3）目的條帶大小ECL后可以直接比較。

貨號

產品名稱	貨號	規格	價格
《Western Blot專用自發光Marker》	LU205-100	0.5 mL自發光Marker (100次)	￥600

儲存條件

本產品在-20 ℃可保存至少3年。

產品原理

《Western Blot專用自發光Marker》含有6個純化的蛋白質，均含有可被小鼠、兔子和山羊等各類抗體識別的基團，當進行化學發光（ECL）檢測時，6個蛋白質由于結合了相應的抗體，也可以發光，從而達到自發光的效果。

自發光Marker發出的光與目的蛋白質條帶發的光一樣，可以通過X-光膠片曝光或者ECL發光成像儀進行檢測?！蹲园l光Marker》可以為Western Blot提供精確的分子量標準（注：6個蛋白質中的5個都經過質譜的鑒定），也可用于監控一抗、二抗和ECL過程。

產品組成

《自發光Marker》：500 μL，含6個可自發光的蛋白質，分子量從23 – 117 kDa。

產品優點

《Western Blot專用自發光Marker》可以為Western Blot提供精確的分子量標準（注：6個蛋白質中的5個都經過質譜的鑒定，為精確分子量），用于監控一抗、二抗和ECL過程。

注：傳統預染蛋白質Marker的由于經過了化學修飾的過程，其分子量是不精確的，其誤差有可能達到好幾個kDa，而自發光Marker由于沒有經過化學染色的過程，其分子量是精確的。

使用方法

1.        《自發光Marker》室溫融化后可以在SDS-PAGE膠中直接上樣。

2.        《自發光Marker》的使用量，一般上5 μL即可。如有必要，也可根據您使用膠的厚度、上樣孔的寬度、一抗和二抗的種類、滴度以及ECL液的靈敏度等相關因素進行適當的調整，一般在2-10 μL之間。

       注：（1）ECL液建議使用本公司的《超敏ECL發光液》，使用該ECL液，《自發光Marker》的使用量2 μL就足夠。經比較測試：本公司的《超敏ECL發光液》在靈敏度和發光的穩定性方面都比目前市面上大量使用的Millipore ECL液（貨號：WBKLS0500）更靈敏和更穩定，價格卻更便宜，還可以大大節省自發光Marker和一抗、二抗的用量。詳情請見本公司《超敏ECL發光液》說明書。（2）《自發光Marker》上樣量過大時可能會有微弱的雜帶，可以通過減少上樣量來解決。

3.        《自發光Marker》可以與本公司或者別的公司的《預染Marker》一起使用，更有利于全程監控Western Blot所有環節。

         注：（1）《自發光Marker》和《預染Marker》根據您的喜好，即可以分開來上樣，也可以在同一個泳道上兩種Marker。

（2） 如果同一個泳道上兩種Marker時，最好先將兩種Marker在離心管中勻混后，再上樣，如此操作，Marker的條帶會更漂亮。

4.        轉膜后，進行正常的封閉、一抗和二抗孵育，最后進行ECL發光檢測。

5.        ECL后，可以同時檢測到6個自發光條帶和目的條帶（如圖1B所示）。目的條帶的大小一目了然。

產品效果

圖1. 《雙色預染Marker 和自發光Marker套裝》實驗效果圖。（A）《雙色預染Marker》經電泳并轉膜后的效果圖。（B）《自發光Marker》經ECL后的效果圖。（C）《雙色預染Marker》和《自發光Marker》合并后的彩色效果圖。（D）《雙色預染Marker》和《自發光Marker》合并后的黑白效果圖。實驗條件：12% SDS-PAGE膠，一抗為小鼠Anti-Actin抗體，二抗為HRP標記的山羊抗小鼠抗體。泳道1：預染Marker； 泳道2：自發光Marker；泳道3：細胞裂解樣品。注：《自發光Marker》中的117.52 kDa條帶未經質譜鑒定，為理論分子量，別的5個條帶均已經過質譜鑒定，為實際分子量。

附錄（一）《自發光Marker》質譜圖

圖2. 《自發光Marker》質譜圖?！蹲园l光Marker》中的117.52 kDa條帶未經質譜鑒定，為理論分子量，別的5個條帶均已經過質譜鑒定，為實際分子量。本圖為5個蛋白質的質譜圖。