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《支原體活菌種：豬鼻支原體》使用說明書

（版本211220）

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貨號

        MH030

含量

        豬鼻支原體（M.Hyorhinis）甘油菌種：0.1 mL

儲存條件

        該產品通過冰袋運輸，收到產品后請放于-80 ℃保存。

產品說明

        本豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）活菌種是從ATCC引進（ATCC 17981珠）的菌種。

        豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）是體外細胞培養中最常見的污染細胞的支原體種類之一，大約占細胞培養中支原體污染的20-50%。

支原體的擴增培養

       取豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）活菌種 5 μL ，接種到 10 mL 的含20%小牛血清（已滅活）的支原體液體培養基（含葡萄糖，不含精氨酸，pH值為7.6）中，在37 ℃普通的細菌培養箱，有氧培養。

        培養2-5天后，可以看到接種有Mycoplasma hyorhinis的支原體液體培養基（含葡萄糖，不含精氨酸）與不接菌的對照管相比，其顏色會由初始的鮮紅色變成黃色（pH值降低，，如圖1所示），說明Mycoplasma hyorhinis培養成功。

         注意：接種后，支原體液體培養基（含葡萄糖，不含精氨酸）的顏色一旦由初始的鮮紅色變成黃色后，不能繼續培養，否則支原體很容易因pH值太低而死亡。

        變色后的菌液即可用作《發光法支原體檢測試劑盒》、《PCR法支原體檢測試劑盒》、《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》或《探針法支原體檢測試劑盒》的陽性對照。

       也可以將豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）活菌種直接接種到含10%血清的哺乳動物細胞培養液中，與細胞共同培養，培養3天后，即可使用該細胞培養上清作為《發光法支原體檢測試劑盒》、《PCR法支原體檢測試劑盒》、《一步法恒溫支原體檢測試劑盒》或《探針法支原體檢測試劑盒》的陽性對照。注意：如果將支原體接種到哺乳動物細胞培養液中進行擴增培養，必須與細胞共同培養，不能單獨培養！

支原體的保存

取上述活化培養后的豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis），無菌操作加入等體積的已滅菌的20%的甘油（用含0.9%氯化鈉的生理鹽水配制），分裝到凍存管中，凍存在-80℃冰箱作為活的菌種保存。

圖1. 將豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）接種到支原體液體培養基（含葡萄糖，不含精氨酸，pH值為7.6），有氧培養3天后的結果。（A）為未接種的對照管；（B）為接種豬鼻支原體的實驗管?？梢姡航臃N有豬鼻支原體的實驗管，培養3天后其顏色會由初始的鮮紅色變成黃色，而對照管顏色不變。

附錄

        本豬鼻支原體菌種與ATCC 17981珠 16S rRNA部分序列比對結果，上面為本豬鼻支原體菌種16S rRNA序列，下面為ATCC 17981珠 16S rRNA序列。可見兩者序列100%相同：

本豬鼻支原體菌種測序結果與ATCC菌種序列比對結果: 

結果表明，本菌種與ATCC 17981序列100%相同，而與 ATCC 29052序列只有99%相同。