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Shanghai Yise Medical Technology Co.,Ltd.
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒
使用說明書（版本PC03）
產品亮點：本公司CCK8產品的質量和價格，只跟日本同仁CCK8產品比較！?
?貨號
產品名稱
貨號
規格
價格
CCK-8細胞活性檢測試劑盒
CK800-1
1 mL (100 Test)
￥120
CCK-8細胞活性檢測試劑盒
CK800-10
10 mL (1000 Test)
￥910
CCK-8細胞活性檢測試劑盒
CK800-30
30 mL (3000 Test)
￥1820
CCK-8細胞活性檢測試劑盒
CK800-100
100 mL (10000 Test)
￥5200
儲存條件
本試劑盒在在-20℃至少可以保存3年，4℃只能保存數月。建議收到產品后，放-20℃冰箱冷凍保存。第一次使用時，室溫融化后，建議按自己實驗需要，分裝到滅菌離心管（比如1 mL/管），繼續放-20℃冰箱冷凍保存。每次實驗時，按需從-20℃冰箱取出相應數量的試劑，室溫融化后使用。
本產品經實際測試：5次左右的反復凍融，對產品質量幾乎沒有任何影響。相反的是：如果4℃放置的時間超過半年，對實驗的影響相對較大。
產品原理
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性相關實驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。
CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（Formazan，參考圖1)。
Water Soluble Tetrazolium-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養基中?；罴毎臄的吭蕉?，則顏色越深。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。
圖1. Water Soluble Tetrazolium-8分子結構及CCK-8檢測原理
鄭重承諾
本公司提供的CCK-8試劑盒為進口分裝產品，與日本同仁化學研究所提供的CCK-8試劑盒幾乎完全一樣，二者的實驗差異極?。ㄔ?/span>5%左右，這幾乎就是不同批次之間的差異），而我們產品的價格只是后者的50-60%左右，具有超高的性價比。
如果有疑問，歡迎廣大客戶自己做對比實驗。任何客戶只要發現，二者在檢測靈敏度、細胞數量與讀值之間的線性關系等方面有明顯的差異，我們一律全額退款！
產品優點
本試劑盒提供了一種靈敏度高、操作簡便、使用安全的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統的MTT 法相比具有明顯的優勢：
1. MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機溶劑溶解；而CCK-8 產生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來的實驗誤差。
2. 由于CCK-8 產生的甲臜是水溶性的，無需吸掉培養基后，再用DMSO 等有機溶劑溶解，非常適合用于懸浮細胞的活性測定。
3. 與MTT 方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。
4. CCK-8 法對細胞無毒性，可以多次測定，選取最佳測定時間。
5. CCK-8 法無需配制，即開即用。
6. CCK-8 法適合大規模、高通量的樣品檢測。
使用方法
1. 在96 孔板中配制100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24 小時（在37℃，5% CO2的條件下）。
2. 向培養板加入10 μL 的待測藥物進行處理。
3. 根據實驗需要，將培養板在培養箱孵育一段時間 （例如：6, 12，24 或48 小時）。
注：如果不進行藥物處理而直接測定細胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。
4. 向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D 值的讀數）。
5. 將培養板在培養箱內孵育2-4 小時。
6. 用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。
7. 如果暫時不測定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時內吸光度不會發生變化。
注意事項
1. 由于96 孔板周圍一圈最容易蒸發，周圍一圈建議不用，改加PBS或水。
2. CCK-8 檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。如果待測體系中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會干擾檢測結果，需設法去除其影響。
3. 當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL培養基)，且加入CCK-8后孵育的時間長一些。
4. 如果細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化，應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8 檢測。
5. 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養基的對照孔中本底的吸光度而消除，因此不會對檢測結果造成影響。
與同仁CCK8比較測試結果（圖2）
